Maradék DNS-teszt

A rekombináns DNS-termékekhez, a monoklonális antitestekhez és egyes vakcinákhoz jelenleg használt sok sejtszubsztrát kóros, mivel ezek a sejtek vagy tumorigének, vagy valóban tumorokból származnak. 

Az ezekből a sejttenyésztési rendszerekből származó termékek előállítása során sejtlízis léphet fel. Ezért a gazdasejt DNS-je, amely esetleg onkogént (-eket) tartalmazhat, jelen lehet a termékben, ami tumorigénes eseményhez vezet a befogadóban. A termelési sémák általában olyan tisztítási eljárásokat tartalmaznak, amelyek eltávolítják a nukleinsavakat; azonban még mindig meg kell erősíteni a köztes és a végtermék mintákban jelen lévő maradék gazdaszervezet DNS-mennyiségét.

A maradék DNS mennyiségi meghatározási módszerei

Az EUROLAB nagyon érzékeny módszereket alkalmaz a gazdasejt-maradék nagyon kis mennyiségének kimutatására és számszerűsítésére. A teljes DNS nem specifikus detektálásától a fajspecifikus célszekvenciák detektálásáig a következő módszereket kínáljuk:

• Küszöb teszt - Nagy affinitású DNS-kötő fehérjéket használ az egyszálú DNS-hez a teljes DNS nem specifikus mennyiségi meghatározásához

• Hibridizációs teszt - hibridizáció alapú módszer az azonosított eredetű specifikus DNS kimutatására

• qPCR teszt - kvantitatív PCR-alapú módszer az azonosított eredetű specifikus DNS kimutatására; egy specifikus génszekvenciát céloz meg amplifikálás céljából

A minta előkészítése

Függetlenül attól, hogy a maradék DNS meghatározásához melyik módszert alkalmazzák, az elemzés sikere nagyban függ az első minta feldolgozásától. Minden teszt különböző érzékenységgel rendelkezik a szermaradványokkal szemben (pl. Szerves oldószerek, detergensek, magas sókoncentrációk, etanol vagy maradék fehérjék), és ezeket figyelembe kell venni a mátrix-specifikus előkezelés során. A vizsgálati és a minta mátrixszal való kompatibilitás biztosítása érdekében a következő előkezeléseket kell figyelembe venni: szerves extrakció, Proteinase K kezelés, mágneses gyöngyök, fenolmentes Wako extrakció vagy más oszlopalapú nukleinsavkötési módszerek és etanolos kicsapás társszennyező anyagok. Fontos megjegyezni, hogy a termék tisztítási folyamatának változásai befolyásolják a minta mátrixot, és később befolyásolhatják a vizsgálati módszert.

Teszt érvényesítése

A Nemzetközi Megfelelőségi Konferencia (ICH) irányelvei szerint minden kvantitatív vizsgálat validálást igényel a pontosság, a pontosság, a detektálási és mennyiségi határok, a linearitás és a specificitás szempontjából. Az ICH irányelveknek megfelelően validáljuk a DNS-tesztjeinket egy standard mátrix alkalmazásával, valamint elvégezzük a termékekhez szükséges minta-specifikus validációkat egy későbbi klinikai szakaszban.