HPRT teszt

Bu in vitro A kísérletet a tesztelem génmutációk kiváltásának lehetőségének értékelésére végeztük HPRT (hipoxantin-guanin-foszforibozil-transzferáz) teszt segítségével, a kínai hörcsög V79 sejtvonal segítségével. A HPRT rendszer észleli az alappáros mutációkat, a frame-shift mutációkat, valamint a kis deléciókat és inszerciókat.

A mutagenitás további tesztjei a reverz mutációs teszt (baktériumokat használva) és az egér limfóma teszt (emlős sejteket használva).

Az anyag mutagén hatásának HPRT-vizsgálattal történő megjóslásához a V79 sejtek kolóniaképző képességét 6-tioguanin (TG) hozzáadásával vizsgálják a táptalajhoz. A mutagén anyagok további mutációt okoznak a hipoxantin-guanin-foszforiboziltranszferáz (HPRT) enzimet kódoló génben. Ennek a génnek a mutációi miatt az enzimszekvencia helytelenül expresszálódik, ami a Salvage útvonalon keresztüli nukleotidszintézishez szükséges funkcióvesztést eredményezi.

A sejtek nukleotidokat nyerhetnek vagy de novo bioszintézissel, vagy energiatakarékos újrafeldolgozási utakon (Recovery Path) szabad bázisok (pl. Adenin, guanin) felhasználásával.

Szolíd hprt- A gént tartalmazó V79 sejtek a toxikus purin bázis analóg TG-t beépítik a DNS-be a Rescue útvonalon keresztül, gátolva a sejtek anyagcseréjét és a citotoxicitást (1. ábra).

A HPRT enzim funkciójának elvesztése mutációk miatt, mivel a mentési út kizárt de novo Fokozott szintézishez vezet. Az érintett V79 sejtek ezért nem képesek toxikus TG-t beépíteni a DNS-be. Tehát, míg a mutáns sejtek szaporodhatnak TG jelenlétében, a HPRT-t tartalmazó normál sejtek nem.

A mutagenitás értékelése

A vizsgált vegyi anyag egyértelműen pozitívnak tekinthető bármely vizsgált vizsgálati körülmény között.

• A vizsgálati koncentrációk közül legalább az egyik statisztikailag szignifikáns növekedést mutat az egyidejűleg negatív kontrollhoz képest.
• - a növekedés a koncentráció függvénye, ha megfelelő hajlampróbával értékelik, és -
• az eredmények bármelyike ​​kívül esik a korábbi negatív kontrolladatok tartományán.
• Szerencsére a mutációk koncentráció-függő növekedését a tartományukban kell megvitatni, ha a megfelelő negatív és oldószer-kontrollokban alacsony a spontán mutánsok gyakorisága.

fontosság

A HPRT-teszt helyettesítheti az egér limfóma tesztet a tesztelem részeként, ha a kezelés után megfigyelt vizsgálati elem kicsapódik.