Test del DNA residuo

Molti substrati cellulari attualmente utilizzati per prodotti a DNA ricombinante, anticorpi monoclonali e alcuni vaccini sono anormali perché queste cellule sono cancerogene o in realtà derivate da tumori. 

La lisi cellulare può verificarsi durante la produzione di prodotti da questi sistemi di colture cellulari. Pertanto, il DNA della cellula ospite che potrebbe contenere uno o più oncogene può essere presente nel prodotto, portando a un evento tumorigenico nel ricevente. Gli schemi di produzione generalmente includono procedure di purificazione che rimuovono gli acidi nucleici; tuttavia, è ancora necessario confermare la quantità di DNA ospite residuo presente nei campioni di prodotto intermedio e finale.

Metodi di quantificazione del DNA residuo

EUROLAB utilizza metodi altamente sensibili per rilevare e quantificare quantità molto piccole di DNA residuo della cellula ospite. Dalla rilevazione aspecifica del DNA totale alla rilevazione di sequenze target specie-specifiche, offriamo i seguenti metodi:

• Test di soglia - Utilizza proteine ​​leganti il ​​DNA ad alta affinità per il DNA a filamento singolo per la quantificazione aspecifica del DNA totale

• Test di ibridazione - un metodo basato sull'ibridazione per la rilevazione di DNA specifico di origine identificata

• Test qPCR - un metodo quantitativo basato sulla PCR per la rilevazione di DNA specifico di origine identificata; prende di mira una sequenza genica specifica per l'amplificazione

preparazione del campione

Indipendentemente dal metodo utilizzato per determinare il DNA residuo, il successo dell'analisi dipende in gran parte dall'elaborazione del primo campione. Ogni test ha una sensibilità diversa ai residui (ad esempio solventi organici, detergenti, alte concentrazioni di sale, etanolo o proteine ​​residue) e dovrebbe essere considerato per un pretrattamento specifico per matrice. Per garantire la compatibilità con il test e la matrice del campione, è necessario considerare i seguenti pretrattamenti: estrazione organica, trattamento con proteinasi K, sfere magnetiche, estrazione Wako priva di fenolo o altri metodi di legame degli acidi nucleici basati su colonna e co-precipitanti di precipitazione in etanolo. È importante notare che i cambiamenti nel processo di purificazione del prodotto influenzano la matrice del campione e possono successivamente influenzare il metodo di prova.

Convalida del test

Secondo le linee guida della Conferenza internazionale sull'armonizzazione (ICH), tutti i saggi quantitativi richiedono la convalida per precisione, accuratezza, limiti di rilevamento e quantificazione, linearità e specificità. In conformità con le linee guida ICH, convalidiamo i nostri test del DNA utilizzando una matrice standard, oltre a eseguire le convalide specifiche del campione richieste per i prodotti in una fase clinica successiva.