Quando si producono prodotti biologici (grandi molecole) è imperativo che ogni lotto prodotto sia conforme a specifiche predeterminate. EUROLAB fornisce supporto alla produzione e test di rilascio dei lotti per i biologici.
L'esclusione dimensionale, lo scambio ionico e la cromatografia in fase inversa vengono spesso utilizzati per i test di identificazione e rilascio del lotto di purezza di grandi molecole mediante HPLC. EUROLAB può eseguire test di caduta batch per identità e purezza in modo affidabile ed efficiente, seguendo metodi convalidati.
Gli aggregati proteici e le impurità, come frammenti proteici o componenti non reagiti dalla produzione di proteine coniugate o di fusione, possono essere analizzati mediante HPLC mediante cromatografia ad esclusione dimensionale (SEC). SEC può essere utilizzato per stimare la massa molecolare mediante standard di massa destrano e rilevamento dell'indice di rifrazione (RI). In alternativa, SEC può essere combinato con RI e rilevamento della dispersione della luce per misurare la massa molecolare di composti biologici più grandi e intatti.
La spettrometria di massa può essere utilizzata per identificare i prodotti biologici e avvisare il produttore di qualsiasi contaminazione. È possibile acquistare standard di riferimento di impurità note per identificare positivamente l'impurità. EUROLAB ha una vasta esperienza nell'esecuzione di test di caduta di lotti per farmaci biologici in combinazione con un Triple Quad 6500 + acquistato di recente e un QTOF-MS. Per le proteine di grandi dimensioni, la mappatura dei peptidi dopo la digestione con tripsina viene comunemente utilizzata per confermare la loro identità. TOF-MS è anche comunemente usato per analisi di massa incontaminate, a volte aggiunto ai test di identità e purezza per i biologici. TOF-MS è una potente piattaforma che può essere utilizzata anche per studiare le modificazioni post-traduzionali delle proteine.
SDS-PAGE separa le proteine in un gel di poliacrilammide in base alle dimensioni. SDS riveste le proteine con una carica negativa e le molecole vengono estratte da una matrice di gel facendo passare una corrente attraverso il gel. Le proteine più grandi hanno più difficoltà a muoversi nel gel, quindi le proteine di diverse dimensioni si separano. Le proteine tagliate o degradate possono essere rilevate mediante imaging di bande diverse dalla banda prodotta dal prodotto biologico.
I western blot vengono eseguiti eseguendo prima un gel SDS-PAGE e poi trasferendo le proteine su una membrana. Un anticorpo specifico per la proteina di interesse è attaccato alla membrana per legarsi alla proteina. Viene quindi aggiunto un anticorpo secondario coniugato che legherà l'anticorpo primario e consentirà la visualizzazione della proteina di interesse. Questo metodo può essere utilizzato per identificare il prodotto proteico o le impurità correlate al prodotto.
ELISA viene utilizzato per rilevare le proteine e determinare la concentrazione della proteina di interesse. ELISA indiretto, diretto e sandwich sono le varianti più comuni di ELISA. In tutte le varianti, un anticorpo si lega alla proteina di interesse e la presenza della proteina viene visualizzata da una reazione colorimetrica. Le letture dell'assorbanza di ciascun pozzetto vengono confrontate con la curva standard per determinare la concentrazione di proteine di interesse da ciascun campione.
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