Test HPRT

Bu in vitro L'esperimento è stato condotto per valutare il potenziale del test item di indurre mutazioni geniche mediante un test HPRT (ipoxantina-guanina-fosforibosil-transferasi) utilizzando la linea cellulare Chinese Hamster V79. Il sistema HPRT rileva mutazioni di coppie di basi, mutazioni frameshift e piccole delezioni e inserzioni.

Altri test di mutagenicità sono il Reverse Mutation Test (utilizzando batteri) e il Mouse Lymphoma Test (utilizzando cellule di mammifero).

Per prevedere l'effetto mutageno di una sostanza mediante il test HPRT, la capacità di formazione di colonie delle cellule V79 viene studiata aggiungendo 6-tioguanina (TG) al terreno di coltura. Gli agenti mutageni causano un'ulteriore mutazione nel gene che codifica per l'enzima ipoxantina-guanina-fosforibosiltransferasi (HPRT). Le mutazioni in questo gene fanno sì che la sequenza enzimatica venga espressa in modo errato, con conseguente perdita della funzione necessaria per la sintesi dei nucleotidi attraverso la via del salvataggio.

Le cellule possono ottenere nucleotidi tramite biosintesi de novo o tramite percorsi di riciclaggio a risparmio energetico (Recovery Path) utilizzando basi libere (ad esempio adenina, guanina).

Un solido hprt- Le cellule V79 con il gene incorporano l'analogo tossico della base delle purine TG nel loro DNA attraverso la via Rescue, causando l'inibizione del metabolismo cellulare e la citotossicità (Figura 1)

Perdita della funzione dell'enzima HPRT a causa di mutazioni, poiché è escluso il percorso di salvataggio de novo Porta a una maggiore sintesi. Le cellule V79 interessate non sono quindi in grado di incorporare TG tossici nel DNA. Pertanto, mentre le cellule mutanti possono proliferare in presenza di TG, le cellule normali contenenti HPRT non lo sono.

Valutazione di mutagenicità

Una sostanza chimica in esame è considerata chiaramente positiva in una qualsiasi delle condizioni sperimentali studiate.

• Almeno una delle concentrazioni del test mostra un aumento statisticamente significativo rispetto al controllo negativo simultaneo.
• L'aumento è correlato alla concentrazione quando valutato da un appropriato test di tendenza e
• qualsiasi risultato non rientra nell'intervallo dei dati storici di controllo negativo.
• Fortunatamente, se c'è una bassa frequenza di mutanti spontanei nei corrispondenti controlli negativi e con solvente, dovrebbe essere discusso un aumento correlato alla concentrazione delle mutazioni all'interno del loro intervallo.

importanza

Il test HPRT può sostituire il test del linfoma del topo come parte della batteria del test se l'elemento del test precipita osservato dopo il trattamento.