Test MTT

Il test MTT si basa sulla divisione del sale di tetrazolio giallo MTT per formare un formazano viola. Una diminuzione del numero di cellule vitali provoca una diminuzione dell'attività metabolica nella coltura di prova. Questa riduzione è direttamente correlata alla quantità di formazano viola formato, come osservato dall'assorbimento.

La proliferazione cellulare con il test MTT e la vitalità delle cellule dopo il trattamento con la sostanza in esame vengono determinate colorimetricamente.

Valutazione della vitalità cellulare mediante metodo di estrazione e colorazione MTT

• L'elemento in esame viene estratto sotto agitazione per un tempo specificato in DMEM integrato con 37% di FBS a 1 +/- 10 ° C e le cellule L929 vengono incubate con l'estratto.
• Poco prima della fine del periodo di incubazione, le cellule vengono valutate al microscopio e viene aggiunto il reagente MTT. Le cellule vengono incubate per circa 2 ore. Quindi, la soluzione di scongelamento (HCl) viene aggiunta a ciascun pozzetto e viene determinata l'assorbanza a 570 nm (lunghezza d'onda di riferimento 650 nm).
• La vitalità delle colture trattate con meno del 70% di estratto di prova rispetto alle colture di controllo non trattate (controllo con solvente) è considerata un chiaro effetto citotossico secondo ISO 10993-5.