Viene preparata una coltura microbica. Per la maggior parte dei batteri, una coltura di 24 ore in brodo nutriente funziona bene. Per la maggior parte dei funghi, una preparazione di spore senza lavaggio salino funziona bene.
Una quantità di coltura microbica (solitamente da 0.010 ml a 0.020 ml) viene posta al centro di ciascuna di una serie di superfici di prova sterili. Questo vaccino può essere distribuito sulla superficie sterile del test in uno schema circolare per ottenere un rivestimento sottile e omogeneo con il microrganismo del test, se lo si desidera.
Per misurare le concentrazioni microbiche iniziali, vengono raccolte una o più superfici di prova inoculate non trattate e vengono enumerati i microrganismi.
Le restanti superfici di prova innestate vengono trattate ciascuna con il prodotto di prova per un periodo di tempo diverso. Immediatamente dopo che sono trascorsi i tempi di trattamento, le superfici di prova vengono poste in una soluzione che neutralizza l'effetto disinfettante del prodotto e i microrganismi sopravvissuti al trattamento con il disinfettante o il disinfettante vengono coltivati ed enumerati.
I risultati del test time-killing sono tabulati e riportati tabulando le concentrazioni microbiche sulle superfici del test, solitamente in funzione della durata del trattamento con il disinfettante o disinfettante.