Test di riduzione antimicrobica con il metodo di uccisione del tempo

I test Time-Kill In Vitro sono chiamati "test di sospensione" perché il volume misurato dei batteri minacciosi o della sospensione fungina viene trasferito su un materiale di prova liquido, diluito o pulito per determinare la velocità con cui una specie minacciata viene uccisa. Queste stesse procedure si applicano in linea di principio ai test antimicrobici tensioattivi secondo i metodi ASTM e AATCC.

Il concetto di base dello studio Time-Kill Kinetics è la determinazione del tasso di uccisione di un microrganismo da parte di un prodotto in funzione dei dati di sopravvivenza registrati a punti temporali di esposizione adeguati in modo che possa essere generato un grafico che modella il declino della popolazione.

Generalmente e non ufficialmente, 3 Log ₁₀ la riduzione è considerata il livello di prestazione minimo che indica che un prodotto ha una significativa attività di uccisione contro un particolare microrganismo. Meno indica che un numero relativamente elevato di microrganismi sopravvive dopo il trattamento con il prodotto, ad esempio 1 Log in un milione di popolazione batterica ₁₀ riduzione (un piccolo numero quando si tratta di contaminazione batterica) significa che rimangono 100.000 batteri.

I batteri o funghi risultanti vengono solitamente aggiunti come sospensione in soluzione salina allo 99% al prodotto in esame non diluito (10%) o come diluizione al 0.9%. I microrganismi vengono esposti al prodotto per uno o più periodi di tempo specificati dal protocollo, quindi una quantità misurata di sospensione contenente il microrganismo e il prodotto viene trasferito in un liquido neutralizzante che si è dimostrato efficace per eliminare le proprietà antimicrobiche del prodotto.

Questa sospensione viene quindi diluita in serie (solitamente 1:10) e aliquote di due o più serie di diluizioni vengono versate o sparse su un terreno agar per consentire il conteggio delle colonie batteriche o fungine. La chiave di questo processo è che ogni colonia rappresenta la crescita di un singolo microrganismo sopravvissuto all'esposizione al prodotto e quindi il numero di sopravvissuti enumerati per una data diluizione post-esposizione nella sospensione originale del prodotto / microrganismo. Questo numero è quindi la percentuale e il registro ₁₀ utilizzato in combinazione con il numero di popolazione iniziale (come descritto sopra ma numerato dalle diluizioni della sospensione originariamente utilizzata per inoculare il prodotto) per determinare le riduzioni.