Test di citotossicità colorato con BCA

Reagenti BCA, un BCA solubile in acqua e stabile (acido bicinconinico) e un Cu2 alcalino ⁺ Consiste in una soluzione.

Gli amminoacidi cisteina, cistina, triptofano e tirosina, che sono componenti di ogni cellula, si legano a questi reagenti e, in questo processo, Cu2 ^{+ '} buon Cu ^{a +} si abbassa. Cu ⁺ Quindi si lega all'acido bicinconinico per formare un colorante viola solubile in acqua.

L'intensità del colorante viola è correlata al numero di cellule nella coltura monitorata dall'assorbanza.

Valutazione dell'inibizione della crescita cellulare mediante metodo di estrazione e colorazione BCA

• L'elemento in esame viene estratto sotto agitazione per un tempo specificato in DMEM integrato con 37% FBS a 1 ± 10 ° C e le cellule L929 vengono incubate con l'estratto.
• Poco prima della fine del periodo di incubazione, le cellule vengono valutate al microscopio.
• Dopo l'incubazione, le cellule vengono lavate con un tampone e quindi vengono aggiunti i reagenti BCA. Le cellule vengono incubate con questi reagenti per 0.5 - 2 ore e l'assorbanza viene determinata a 550 nm.
• Secondo ISO 10993-5, gli effetti citotossici possono essere valutati in base al contenuto proteico delle colture utilizzate come misura per la crescita cellulare. L'inibizione della crescita di colture trattate con più del 30% di estratto di prova rispetto alle colture di controllo non trattate (controllo con solvente) è considerata un chiaro effetto citotossico.