Test di eluizione

Bu in vitro Il metodo analizza il potenziale citotossico dell'oggetto in esame al microscopio in conformità con USP 41, sezione <87>.

Test di eluizione

Le cellule pre-seminate vengono coltivate con un estratto del materiale di prova e quindi, dopo un periodo di trattamento di 48 ore, viene esaminata la reattività biologica delle cellule.

Valutazione dell'inibizione della crescita cellulare mediante metodo di estrazione e valutazione microscopica

L'elemento in esame viene estratto sotto agitazione per 37 ore in MEM integrato con 1% FBS a 10 ± 24 ° C.
Alla fine del periodo di incubazione, le cellule vengono esaminate al microscopio per i cambiamenti morfologici. La bioreattività (degenerazione e malformazione cellulare) è descritta e valutata su una scala da 0 a 4 (vedi tabella). Vengono valutate le risposte delle colture cellulari trattate con l'estratto della sostanza in esame e dei controlli.
Se la risposta all'estratto dell'elemento in prova non è superiore al grado 2 (leggermente reattivo), l'elemento in prova soddisfa i requisiti del test.

laurea	Reattività	Condizioni di tutte le culture
0	no	Granuli intracitoplasmatici discreti; nessuna frammentazione cellulare
1	luce	Più del 20% delle cellule non sono rotonde, attaccate in modo lasco e non contengono granuli intracitoplasmatici; occasionalmente ci sono cellule lisate
2	luce	Più del 50% delle cellule non sono rotonde e mancano di granuli intracitoplasmatici; ampia frammentazione cellulare e assenza di spazi vuoti tra le celle
3	Orta	Più del 70% degli strati cellulari non contiene celle rotonde o si rompono
4.	grave	Quasi completa distruzione degli strati cellulari

protocollo
Linea cellulare	Cellule L929 (ATCC n. CCL1, clone NCTC 929 (topo tessuto connettivo), clone del ceppo L (DSMZ))
analiz	Valutazione microscopica
Tempo di estrazione	ore 24
Periodo di incubazione	ore 48
Controlli di qualità	Controllo solvente: MEM 10% FBS Controllo negativo: materiale in polietilene ad alta densità (HDPE) Controllo positivo: 0.1% di zinco-dietilditiocarbammato (ZDEC), 0.25% di zinco-dibutilditiocarbammato (ZDBC)
Consegna dei dati	Reattività biologica del materiale di prova secondo USP 41, parte <87>
Previsione positiva	Se la risposta all'estratto dell'elemento in prova non è maggiore del 2 ° ordine (leggermente reattivo), l'elemento in prova soddisfa i requisiti del test.

Test di microbiologia

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