ASTM E1052 - Test di sospensione del tempo per virus

ASTM E1052 Virus Suspension Time-Killing Test secondo i criteri US EPA e FDA può essere eseguito nel laboratorio EUROLAB come semplice visualizzazione o in condizioni operative GLP più estese.

RIEPILOGO DEL TEST ASTM E1052

• Il virus del test stock congelato viene scongelato e circa 0.1 log per 6 ml ₁₀ È diluito a un titolo di unità infettiva.
• Se richiesto dallo sponsor dello studio, il virus in esame viene caricato con terreno organico al livello appropriato. Ciò avviene in genere quando il prodotto in esame è destinato ad essere commercializzato come disinfettante a una fase.
  • L'EPA richiede un carico di sporco organico del 5% per la sua dichiarazione di disinfettante in un'unica fase.
• Il prodotto in esame viene preparato con la diluizione d'uso specificata dallo sponsor dello studio, se appropriato. Un volume uguale di soluzione salina tamponata o terreno di coltura cellulare viene preparato per servire come controllo del recupero del virus.
• Il vaccino preparato viene aggiunto al prodotto in esame e al mezzo di controllo per il recupero del virus alla velocità di 1 parte di virus + 9 parti di prodotto in esame (secondo il metodo).
• Dopo che il tempo di contatto di lavoro è stato chiuso, le sospensioni di prova e di recupero vengono neutralizzate con il metodo più appropriato per l'ingrediente attivo contenuto nella sostanza in esame, ad esempio mediante diluizione in un neutralizzatore chimico o filtrazione attraverso una colonna di gel Sephacryl.
• Un'aliquota della diluizione d'uso della sostanza in esame viene neutralizzata allo stesso modo della sospensione di prova. Viene utilizzato per stabilire il controllo della citotossicità per determinare la diluizione più bassa, se esiste, alla quale la sostanza in esame danneggia le cellule ospiti.
• Parte del controllo della citotossicità viene presa e inoculata con una sospensione virale a bassa concentrazione. Viene utilizzato per stabilire il controllo di neutralizzazione per verificare l'efficacia del metodo di neutralizzazione scelto.
• Il test di neutralizzazione, il recupero, il controllo della citotossicità e le sospensioni di controllo della neutralizzazione vengono diluiti in serie nel terreno appropriato. Ciascuna diluizione viene piastrata quattro volte per accogliere i monostrati cellulari in un vassoio da 24 pozzetti. Il terreno viene aggiunto a ciascun pozzetto e il sistema virale della cellula ospite viene lasciato incubare per il tempo appropriato.
• Alla fine del periodo di incubazione, il test viene valutato utilizzando metodi di coltura cellulare standard.
  • Ogni pozzetto nel vassoio viene esaminato al microscopio per la presenza di effetti citopatici (CPE) dell'infezione. I pozzetti di controllo della citotossicità vengono esaminati per i danni causati dal prodotto in esame. I test di conferma vengono utilizzati secondo necessità.
  • Il metodo Spearman-Karber o un altro metodo statistico adeguato viene utilizzato per misurare la quantità di virus infettivo presente nel dosaggio.