ASTM E1053 - Test di eliminazione del tempo di superficie per i virus

ASTM E1053 Virus Suspension Time-Killing Test secondo i criteri US EPA e FDA può essere eseguito nel laboratorio EUROLAB come semplice visualizzazione OPPURE in condizioni operative GLP più estese.

RIEPILOGO DEL METODO ASTM E1053

• Il virus stock da utilizzare viene scongelato e diluito a una concentrazione appropriata.

• Se richiesto dallo sponsor dello studio, il virus in esame viene caricato con terreno organico al livello appropriato. Ciò avviene in genere quando il prodotto in esame è destinato ad essere commercializzato come disinfettante a una fase.
  • L'EPA richiede un carico di sporco organico del 5% per la sua dichiarazione di disinfettante in un'unica fase.
• Il prodotto in esame viene preparato con la diluizione d'uso specificata dallo sponsor dello studio, se appropriato. Un volume uguale di soluzione salina tamponata o terreno di coltura cellulare viene preparato per servire come controllo del recupero del virus.
• Il vaccino virale preparato viene distribuito su tutta la superficie di una capsula di Petri in vetro e lasciato asciugare.
• Alla fine del periodo di essiccazione, il prodotto in esame viene applicato al film virale.
  • Tipicamente verranno aggiunti 2.0 ml di prodotto di prova per diluizione d'uso. Se viene utilizzato un prodotto spray, verrà applicato come 6 spruzzi da 8 a 4 pollici o come appropriato secondo le istruzioni dello Sponsor.
• Dopo che il tempo di contatto di lavoro è scaduto, le sospensioni di prova e di recupero vengono raccolte utilizzando un raschietto cellulare e neutralizzate utilizzando il metodo più appropriato per gli ingredienti attivi contenuti nella sostanza in esame.
  • I metodi comuni di neutralizzazione includono la diluizione in neutralizzatori chimici, la filtrazione con una matrice di gel fisica (ad esempio colonne di gel Sephacryl) o una loro combinazione.
• Un'aliquota della diluizione d'uso della sostanza in esame viene neutralizzata allo stesso modo della sospensione di prova. Viene utilizzato per stabilire il controllo della citotossicità per determinare la diluizione più bassa, se esiste, alla quale la sostanza in esame danneggia le cellule ospiti.
• Parte del controllo della citotossicità viene presa e inoculata con una sospensione virale a bassa concentrazione. Viene utilizzato per stabilire il controllo di neutralizzazione per verificare l'efficacia del metodo di neutralizzazione scelto.
• Il test di neutralizzazione, il recupero, il controllo della citotossicità e le sospensioni di controllo di neutralizzazione vengono diluiti in serie nel terreno appropriato. Ciascuna diluizione viene applicata quattro volte su monostrati di cellule ospiti. Il terreno viene aggiunto a ciascun monostrato e il sistema virale della cellula ospite viene lasciato incubare per il tempo appropriato. La maggior parte dei test viene incubata per un periodo da 7 a 10 giorni.
• Alla fine del periodo di incubazione, il test viene valutato utilizzando metodi di coltura cellulare standard.
  • Ogni pozzetto nel vassoio viene esaminato al microscopio per la presenza di effetti citopatici (CPE) dell'infezione, come il rotolamento cellulare, il peeling e la degradazione del monostrato. I pozzetti di controllo della citotossicità vengono esaminati per i danni causati dal prodotto in esame. I test di conferma vengono utilizzati secondo necessità.
  • Il metodo Spearman-Karber o un altro metodo statistico adeguato viene utilizzato per misurare la quantità di virus infettivo presente nel dosaggio.

CRITERI DI SUCCESSO DELL'EVENTO VIRUSIDALE

• Almeno 4 log per operatore ₁₀ l'unità infettiva dovrebbe essere liberata dal controllo del recupero dei virus.
• Il prodotto in esame mostra la completa inattivazione del virus in esame in tutte le diluizioni del test o
• Se il prodotto di prova neutralizzato causa citotossicità nel test, il livello di citotossicità osservato supera i 3 log ₁₀ riduzione
• I controlli di neutralizzazione mostrano tipicamente livelli simili di effetti citopatici rispetto a un controllo, indicando che il metodo di neutralizzazione scelto ha successo.