HPRT test

Bu in vitro Experiment sa uskutočňoval na vyhodnotenie potenciálu testovanej položky indukovať génové mutácie pomocou testu HPRT (hypoxantín-guanín-fosforibozyl-transferáza) s použitím bunkovej línie čínskeho škrečka V79. Systém HPRT detekuje mutácie párov báz, mutácie posunu rámcov a malé delécie a inzercie.

Ďalšími testami mutagenity sú test reverznej mutácie (pomocou baktérií) a test na myší lymfóm (pomocou buniek cicavcov).

Na predpovedanie mutagénneho účinku látky pomocou testu HPRT sa skúma schopnosť tvoriť kolónie buniek V79 pridaním 6-tioguanínu (TG) do kultivačného média. Mutagénne látky spôsobujú ďalšiu mutáciu v géne kódujúcom enzým hypoxantín-guanín-fosforibozyltransferázu (HPRT). Mutácie v tomto géne spôsobujú nesprávnu expresiu enzýmovej sekvencie, čo vedie k strate funkcie nevyhnutnej pre syntézu nukleotidov cestou Salvage.

Bunky môžu získavať nukleotidy buď pomocou biosyntézy de novo, alebo energeticky úspornými recyklačnými cestami (Recovery Path) pomocou voľných báz (napr. Adenín, guanín).

Pevná látka hprt- Bunky V79 s génom začleňujú toxický analóg purínovej bázy TG do svojej DNA prostredníctvom záchrannej dráhy, čo spôsobuje inhibíciu bunkového metabolizmu a cytotoxicity (obrázok 1).

Strata funkcie enzýmu HPRT v dôsledku mutácií, pretože je vylúčená záchranná cesta de novo Vedie to k zvýšenej syntéze. Ovplyvnené bunky V79 preto nie sú schopné zabudovať toxický TG do DNA. Zatiaľ čo teda mutantné bunky môžu proliferovať v prítomnosti TG, normálne bunky obsahujúce HPRT nie sú.

Hodnotenie mutagenity

Testovaná chemikália sa považuje za jednoznačne pozitívnu v ktorejkoľvek zo študovaných testovacích podmienok.

• Aspoň jedna z testovaných koncentrácií vykazuje štatisticky významné zvýšenie v porovnaní so súčasnou negatívnou kontrolou.
• Nárast súvisí s koncentráciou, ak sa hodnotí vhodným trendovým testom a
• akýkoľvek z výsledkov je mimo rozsahu historických údajov o negatívnej kontrole.
• Našťastie, ak je v zodpovedajúcich negatívnych a rozpúšťadlových kontrolách nízka frekvencia spontánnych mutantov, malo by sa diskutovať o zvýšení mutácií v ich rozmedzí v závislosti od koncentrácie.

dôležitosť

Test HPRT môže nahradiť test na myší lymfóm ako súčasť testovacej batérie, ak sa po ošetrení zrazí pozorovaná položka.