Test MTT

Test MTT je založený na štiepení žltej tetrazoliovej soli MTT za vzniku fialového formazanu. Zníženie počtu životaschopných buniek spôsobuje zníženie metabolickej aktivity v testovanej kultúre. Toto zníženie priamo súvisí s množstvom vytvoreného fialového formazanu, ako je pozorované absorpciou.

Proliferácia buniek testom MTT a životaschopnosť buniek po pôsobení testovanej látky sa stanovujú kolorimetricky.

Vyhodnotenie životaschopnosti buniek extrakčnou metódou a farbením MTT

• Testovaný predmet sa extrahuje trepaním po stanovenú dobu v DMEM doplnenom 37% FBS pri 1 ± 10 ° C a bunky L929 sa inkubujú s extraktom.
• Krátko pred koncom inkubačnej doby sa bunky mikroskopicky vyhodnotia a pridá sa činidlo MTT. Bunky sa inkubujú približne 2 hodiny. Potom sa do každej jamky pridá rozpúšťací roztok (HCl) a stanoví sa absorbancia pri 570 nm (referenčná vlnová dĺžka 650 nm).
• Životaschopnosť kultúr ošetrených menej ako 70% testovaného extraktu v porovnaní s neošetrenými kontrolnými kultúrami (kontrola rozpúšťadlom) sa považuje za jasný cytotoxický účinok podľa ISO 10993-5.