Testovacia metóda na luciferázu ARE-Nrf2

Chemické / in vitro Vďaka zvýšenej spoľahlivosti testov môžu teraz výrobcovia a tvorcovia receptov určiť, či je látka činidlom senzibilizujúcim pokožku, bez toho, aby bolo potrebné testovanie na zvieratách. Každá z dostupných analýz sumarizuje niektoré prvky dráhy nepriaznivých výsledkov (AOP) spojené s odpoveďou senzibilizujúcou na pokožku u ľudí. 

Pomocou integrovanej stratégie testovania, ktorá zahŕňa tieto prístupy, na hodnotenie rizika nebezpečenstva senzibilizácie pokožky (Globálne harmonizovaný systém klasifikácie a označovania chemikálií Zaisťuje bezpečnosť a spokojnosť spotrebiteľov, ako aj dodržiavanie právnych predpisov.

Prehľad metódy luciferázového testu ARE-Nrf2

Test luciferázy ARE-Nrf2 je model, ktorý modeluje druhú kľúčovú udalosť v dráhe negatívnych výsledkov senzibilizácie pokožky. in vitro testovacia metóda. Keď je pokožka opakovane vystavená kožnému senzibilizátoru, môže senzibilizačné činidlo spôsobiť, že kožné bunky (t.j. keratinocyty) aktivujú ochrannú génovú cestu, ktorá je spojená so senzibilizáciou pokožky. Čím silnejšia je reakcia keratinocytov, tým väčší je potenciál látky v citlivosti.

Test luciferázy ARE-Nrf2 meria aktiváciu tejto ochrannej génovej dráhy - dráhy antioxidačného / elektrofilného prvku odpovede (ARE) - pomocou detekcie založenej na luminiscencii. Tento test používa modifikovanú keratinocytovú líniu obsahujúcu gén luciferázy pod transkripčnou kontrolou štruktúrneho promótora fúzovaného s ARE prvkom. Po vystavení senzibilizátoru sa aktivujú endogénne gény závislé od Nrf2. Je dobre zdokumentované, že luminiscencia indukovaná luciferázou závisí od expresie Nrf2. Na meranie výstupu luciferázy v reakcii na testované materiály sa používa luminometer. Test ARE-Nrf2 klasifikuje materiály ako pozitívne na schopnosť senzibilizovať pokožku, ak indukujú štatisticky významný luminiscenčný signál, ktorý prekračuje stanovený prah.

Test luciferázy ARE-Nrf2 je vhodný na testovanie viaczložkových látok a zmesí a je pravdepodobnejšie, že predpovedá nízky až stredný potenciál senzibilizácie pokožky na rozdiel od jej vysokého potenciálu senzibilizácie pokožky. Tento test by sa mal použiť aj v spojení s ďalšími testami na bezpečné stanovenie bezpečnosti látky a potenciálu látky senzibilizovať pokožku.