Testovanie antimikrobiálnej redukcie metódou zabíjania času

Testy Time-Kill In Vitro sa nazývajú „suspenzné testy“, pretože nameraný objem suspenzie ohrozujúcich baktérií alebo húb sa prenesie do tekutého testovacieho materiálu, zriedi sa alebo vyčistí, aby sa určilo, ako rýchlo je ohrozený druh zabitý. Rovnaké postupy platia v zásade pre testovanie povrchovo aktívnych antimikrobiálnych látok podľa metód ASTM a AATCC.

Základným konceptom štúdie Time-Kill Kinetics je určiť rýchlosť, akou je mikroorganizmus usmrtený plodinou, ako funkciu údajov o prežití zaznamenaných v adekvátnych časových bodoch expozície, aby bolo možné zostaviť graf, ktorý modeluje pokles populácie.

Všeobecne a neoficiálne, 3 Log ₁₀ zníženie sa považuje za minimálnu úroveň účinnosti, ktorá naznačuje, že výrobok má významnú ničiacu aktivitu proti konkrétnemu mikroorganizmu. Menej znamená, že po ošetrení prípravkom zostáva životaschopný relatívne veľký počet mikroorganizmov – napríklad 1 log na milión bakteriálnej populácie ₁₀ zníženie (malé číslo, pokiaľ ide o bakteriálnu kontamináciu) znamená, že zostane 100.000 XNUMX baktérií.

Výsledné baktérie alebo huby sa pridajú k testovanému produktu buď nezriedené (99 %) alebo ako 10 % riedenie, zvyčajne ako suspenzia v 0.9 % fyziologickom roztoku. Mikroorganizmy sú vystavené produktu počas jedného alebo viacerých období stanovených protokolom, po ktorých sa odmerané množstvo suspenzie obsahujúcej mikroorganizmus a produkt prenesie do neutralizačnej kvapaliny, ktorá sa ukázala ako účinná na odstránenie antimikrobiálnych vlastností produktu.

Táto suspenzia sa potom sériovo zriedi (zvyčajne 1:10) a alikvóty dvoch alebo viacerých riediacich sérií sa nalejú alebo rozotrie na agarové médium, aby sa umožnilo sčítanie bakteriálnych alebo plesňových kolónií. Kľúčom k tomuto procesu je, že každá kolónia predstavuje rast jedného mikroorganizmu, ktorý prežil expozíciu produktu, a preto počet preživších spočítaný pre dané postexpozičné riedenie je v pôvodnej suspenzii produktu/mikroorganizmu. Toto číslo je potom percento a Log. ₁₀ sa používajú v kombinácii s prvým číslom populácie (ako je opísané vyššie, ale očíslované z riedení suspenzie pôvodne použitej na naočkovanie produktu) na stanovenie zníženia v produkte.