Test cytotoxicity zafarbený BCA

Činidlá BCA, vo vode rozpustný a stabilný BCA (kyselina bicinchonínová) a alkalický Cu2 ⁺ Pozostáva z riešenia.

Aminokyseliny cysteín, cystín, tryptofán a tyrozín, ktoré sú zložkami každej bunky, sa viažu na tieto činidlá a v tomto procese sa Cu ^{+ '} dobrá Cu ^{do +} znižuje. Cu ⁺ Potom sa viaže na kyselinu bicinchoninovú a vytvára vo vode rozpustné fialové farbivo.

Intenzita fialového farbiva súvisí s počtom buniek v kultúre, ako sa monitoruje pomocou absorbancie.

Vyhodnotenie inhibície rastu buniek extrakčnou metódou a farbením BCA

• Testovaná položka sa extrahuje za miešania po stanovenú dobu v DMEM doplnenom 37% FBS pri 1 ± 10 ° C a bunky L929 sa inkubujú s extraktom.
• Krátko pred koncom inkubačnej doby sa bunky mikroskopicky vyhodnotia.
• Po inkubácii sa bunky premyjú pufrom a potom sa pridajú činidlá BCA. Bunky sa inkubujú s týmito činidlami po dobu 0.5 - 2 hodín a absorbancia sa stanoví pri 550 nm.
• Podľa ISO 10993-5 možno cytotoxické účinky hodnotiť podľa obsahu bielkovín v kultúrach použitých ako meradlo pre bunkový rast. Inhibícia rastu kultúr ošetrených viac ako 30% testovaného extraktu v porovnaní s neošetrenými kontrolnými kultúrami (kontrola rozpúšťadlom) sa považuje za jasný cytotoxický účinok.