Elučný test

Bu in vitro Metóda analyzuje cytotoxický potenciál testovanej látky mikroskopicky v súlade s USP 41, oddiel <87>.

Elučný test

Predočkované bunky sa kultivujú s extraktom z testovaného materiálu a potom sa po 48 hodinách pôsobenia skúma biologická reaktivita buniek.

Skúšaný predmet sa extrahuje za trepania počas 37 hodín v MEM doplnenom 1% FBS pri 10 ± 24 ° C.
Na konci inkubačnej doby sa bunky mikroskopicky vyšetria na morfologické zmeny. Bioreaktivita (bunková degenerácia a malformácia) je opísaná a odstupňovaná na stupnici od 0 do 4 (pozri tabuľku). Vyhodnocujú sa odozvy bunkových kultúr ošetrených extraktom testovanej látky a kontroly.
Ak reakcia na extrakt testovaného predmetu nie je väčšia ako 2 (mierne reaktívna), testovaný predmet spĺňa požiadavky testu.

stupeň	Reaktivita	Podmienky všetkých kultúr
0	žiadny	Diskrétne intracytoplazmatické granule; žiadna fragmentácia buniek
1	svetlý	Viac ako 20% buniek nie je okrúhlych, voľne pripojených a neobsahuje žiadne intracytoplazmatické granuly; príležitostne existujú lýzované bunky
2	svetlý	Viac ako 50% buniek nie je guľatých a chýba im intracytoplazmatický granulát; rozsiahla fragmentácia buniek a žiadne prázdne medzery medzi bunkami
3	prostredný	Viac ako 70% bunkových vrstiev neobsahuje guľaté bunky alebo sa nerozdeľuje
4.	prísny	Takmer úplné zničenie bunkových vrstiev

protokol
Bunková línia	Bunky L929 (ATCC č. CCL1, NCTC klon 929 (myš z spojivového tkaniva), klon L kmeňa (DSMZ))
analýza	Mikroskopické hodnotenie
Čas extrakcie	24 hodín
Inkubačná doba	48 hodín
Kontroly kvality	Kontrola rozpúšťadla: MEM 10% FBS Negatívna kontrola: polyetylén s vysokou hustotou (HDPE) Pozitívna kontrola: 0.1% dietylditiokarbamát zinočnatý (ZDEC), 0.25% dibutylditiokarbamát zinočnatý (ZDBC)
Doručovanie údajov	Biologická reaktivita testovaného materiálu podľa USP 41, časť <87>
Pozitívna predpoveď	Ak odozva na extrakt testovanej položky nie je väčšia ako 2. rád (mierne reaktívna), testovaná položka spĺňa požiadavky skúšky.

Mikrobiologické testy