Skúška formovania kolónií

V tomto teste sa cytotoxicita výluhu uvoľneného z testovanej látky hodnotí pomocou schopnosti vytvárať kolónie po pôsobení rôznymi koncentráciami extraktu testovanej látky v porovnaní s kontrolami.

50% znižuje zriedenie tvorby kolónií (IC ₅₀ ) zriedenia extraktov (%) je možné určiť vynesením relatívnej kolónie, ktorá sa vytvorí oproti pomerom (%)

Priemerný počet kolónií vytvorených v kultúrach ošetrených čerstvým kultivačným médiom predstavuje absolútnu schopnosť buniek vytvárať kolónie, čo odráža mieru prežitia buniek po pasáži a nasadení na kultivačné platne (100% kontrola).

Hodnotenie schopnosti tvoriť kolónie a cytotoxicity

• Testovaná položka sa extrahuje bunkovým kultivačným médiom pri 37 ± 1 ° C po stanovenú dobu a bunky V79 sa inkubujú s extraktom niekoľko dní.
• Po inkubačnej dobe sa kultúry pozorujú mikroskopicky a opatrne sa premyjú PBS pufrom. Po fixácii metanolom sa kolónie zafarbia Giemsovým farbiacim roztokom.
• Zafarbené kolónie sa vysušia pri teplote miestnosti. Kolónie pozostávajúce z viac ako 50 buniek sa spočítajú manuálne.

Kritériá prijatia testovanej položky:

• IC podľa MHLW ₅₀ limit prijatia: ≥ 90%
• Zníženie relatívnej účinnosti poťahu o viac ako 100% pri 30% koncentrácii testovaného roztoku sa považuje za cytotoxický účinok.