ASTM E1052 - Skúška časovým zabitím pozastavenia vírusu

Test časovej likvidácie vírusu ASTM E1052 na zastavenie vírusu podľa kritérií US EPA a FDA je možné vykonať v laboratóriu EUROLAB ako jednoduchý displej alebo za rozsiahlejších prevádzkových podmienok GLP.

ZHRNUTIE TESTU ASTM E1052

• Zmrazený testovací vírus sa rozmrazí a je približne 0.1 log na 6 ml ₁₀ Je zriedený na titer infekčnej jednotky.
• Ak to požaduje sponzor štúdie, je testovaný vírus naplnený organickou pôdou na príslušnú úroveň. Spravidla sa to robí, keď sa má testovaný produkt predávať ako jednokrokový dezinfekčný prostriedok.
  • EPA vyžaduje pre svoju jednostupňovú dezinfekciu 5% obsah organických nečistôt.
• Testovaný produkt sa pripraví, ak je to vhodné, s riedením použitia stanoveným sponzorom štúdie. Pripraví sa rovnaký objem pufrovaného soľného roztoku alebo média pre bunkovú kultúru, aby slúžil ako kontrola obnovy vírusu.
• Pripravená vakcína sa pridá k testovanému produktu a kontrolnému médiu na obnovenie vírusu v množstve 1 diel vírusu + 9 dielov testovaného produktu (podľa metódy).
• Po uzavretí pracovného kontaktného času sa testovacie a regeneračné suspenzie neutralizujú najvhodnejšou metódou pre aktívnu zložku (aktívne zložky) obsiahnutú v testovanej látke, napríklad zriedením na chemický neutralizátor alebo filtráciou cez gélovú kolónu Sephacryl.
• Alikvotná časť zriedenia podľa použitia testovanej látky sa neutralizuje rovnakým spôsobom ako testovaná suspenzia. Používa sa na stanovenie kontroly cytotoxicity na určenie najnižšieho riedenia, ak vôbec existuje, pri ktorom testovaná látka poškodzuje hostiteľské bunky.
• Určitá časť kontroly cytotoxicity sa odoberie a naočkuje sa vírusovou suspenziou s nízkou koncentráciou. Používa sa na stanovenie kontroly neutralizácie na overenie účinnosti zvolenej metódy neutralizácie.
• Neutralizačný test, regenerácia, kontrola cytotoxicity a neutralizácia sa suspenzie sériovo riedia vo vhodnom médiu. Každé zriedenie sa umiestni štyrikrát, aby sa bunkové monovrstvy umiestnili na 24-jamkovú platňu. Médium sa pridá do každej jamky a vírusový systém hostiteľskej bunky sa nechá inkubovať po vhodnú dobu.
• Na konci inkubačnej doby sa test vyhodnotí pomocou štandardných metód kultivácie buniek.
  • Každá jamka na tácke sa skúma pod mikroskopom na prítomnosť cytopatických účinkov (CPE) infekcie. Jamky na kontrolu cytotoxicity sa skúmajú na poškodenie spôsobené testovaným produktom. Podľa potreby sa používajú potvrdzovacie testy.
  • Na meranie množstva infekčného vírusu prítomného v teste sa používa metóda Spearman-Karber alebo iná vhodná štatistická metóda.