ASTM E1053 - Test povrchového zabitia na vírusy

Test časovej likvidácie vírusu ASTM E1053 na zastavenie vírusu podľa kritérií US EPA a FDA je možné vykonať v laboratóriu EUROLAB ako jednoduchý displej ALEBO za rozsiahlejších prevádzkových podmienok GLP.

ZHRNUTIE METÓDY ASTM E1053

• Zásobný vírus, ktorý sa má použiť, sa roztopí a zriedi na vhodnú koncentráciu.

• Ak to požaduje sponzor štúdie, je testovaný vírus naplnený organickou pôdou na príslušnú úroveň. Spravidla sa to robí, keď sa má testovaný produkt predávať ako jednokrokový dezinfekčný prostriedok.
  • EPA vyžaduje pre svoju jednostupňovú dezinfekciu 5% obsah organických nečistôt.
• Testovaný produkt sa pripraví, ak je to vhodné, s riedením použitia stanoveným sponzorom štúdie. Pripraví sa rovnaký objem pufrovaného soľného roztoku alebo média pre bunkovú kultúru, aby slúžil ako kontrola obnovy vírusu.
• Pripravená vírusová vakcína sa rozprestrie na celý povrch sklenenej Petriho misky a nechá sa vysušiť.
• Na konci periódy sušenia sa testovaný produkt nanesie na vírusový film.
  • Spravidla sa pridajú 2.0 ml produktu na zriedenie na použitie. Ak sa použije produkt v spreji, aplikuje sa ako 6 spreje zo vzdialenosti 8 až 4 palcov alebo podľa pokynov sponzora.
• Po uzavretí času pracovného kontaktu sa testovacie a regeneračné suspenzie zozbierajú pomocou škrabky na bunky a zneutralizujú sa najvhodnejšou metódou pre účinnú látku (účinné látky) obsiahnutú v testovanej látke.
  • Medzi bežné spôsoby neutralizácie patrí riedenie v chemických neutralizátoroch, filtrácia s fyzikálnou gélovou matricou (napr. Gélové kolóny Sephacryl) alebo ich kombinácie.
• Alikvotná časť zriedenia podľa použitia testovanej látky sa neutralizuje rovnakým spôsobom ako testovaná suspenzia. Používa sa na stanovenie kontroly cytotoxicity na určenie najnižšieho riedenia, ak vôbec existuje, pri ktorom testovaná látka poškodzuje hostiteľské bunky.
• Určitá časť kontroly cytotoxicity sa odoberie a naočkuje sa vírusovou suspenziou s nízkou koncentráciou. Používa sa na stanovenie kontroly neutralizácie na overenie účinnosti zvolenej metódy neutralizácie.
• Neutralizačný test, regenerácia, kontrola cytotoxicity a neutralizácia sa suspenzie sériovo riedia vo vhodnom médiu. Každé zriedenie sa nanesie štyrikrát na monovrstvy hostiteľskej bunky. Médium sa pridá do každej monovrstvy a vírusový systém hostiteľskej bunky sa nechá inkubovať po vhodnú dobu. Väčšina testov sa inkubuje po dobu 7 až 10 dní.
• Na konci inkubačnej doby sa test vyhodnotí pomocou štandardných metód kultivácie buniek.
  • Každá jamka na tácke sa skúma pod mikroskopom na prítomnosť cytopatických účinkov (CPE) infekcie, ako je bunkové valcovanie, odlupovanie a degradácia monovrstvy. Jamky na kontrolu cytotoxicity sa skúmajú na poškodenie spôsobené testovaným produktom. Podľa potreby sa používajú potvrdzovacie testy.
  • Na meranie množstva infekčného vírusu prítomného v teste sa používa metóda Spearman-Karber alebo iná vhodná štatistická metóda.

KRITÉRIÁ ÚSPECHU VIRUSIDÁLNYCH PODUJATÍ

• Minimálne 4 denníky na jedného dopravcu ₁₀ infekčná jednotka by mala byť zbavená kontroly obnovy vírusu.
• Testovaný produkt vykazuje úplnú inaktiváciu testovaného vírusu vo všetkých zriedeniach testu alebo
• Ak neutralizovaný testovaný produkt spôsobuje v teste cytotoxicitu, pozorovaná hladina cytotoxicity presahuje 3-log ₁₀ redukcia
• Neutralizačné kontroly typicky vykazujú podobné úrovne cytopatických účinkov v porovnaní s kontrolou, čo naznačuje, že zvolená neutralizačná metóda je úspešná.