HPRT Testi

Bu in vitro deney, test öğesinin Çin Hamster V79 hücre hattı kullanılarak bir HPRT (hipoksantin-guanin-fosforibosil-transferaz) testi vasıtasıyla gen mutasyonlarını indükleme potansiyelini değerlendirmek için gerçekleştirildi. HPRT sistemi, baz çifti mutasyonlarını, çerçeve kayması mutasyonlarını ve küçük silmeleri ve eklemeleri algılar.

Mutajenite için diğer testler, Ters Mutasyon Testi (Bakteriler kullanılarak) ve Fare Lenfoma Testidir (memeli hücreleri kullanılarak).

HPRT testi ile bir maddenin mutajenik etkisini tahmin etmek için, V79 hücrelerinin koloni oluşturma yeteneği, kültür ortamına 6-tiyoguanin (TG) ilave edilerek araştırılır. Mutajenik maddeler, hipoksantin-guanin-fosforibosiltransferaz (HPRT) enzimini kodlayan gende ileri bir mutasyona neden olur. Bu gendeki mutasyonlar, enzim dizisinin yanlış bir şekilde ifade edilmesine yol açarak, Salvage yolu aracılığıyla nükleotid sentezi için gerekli olan işlev kaybına neden olur.

Hücreler nükleotidleri ya de novo biyosentez yoluyla ya da serbest bazlar (örneğin adenin, guanin) kullanarak enerji tasarrufu sağlayan geri dönüşüm yolları (Kurtarma Yolu) yoluyla elde edebilir.

Sağlam bir hprt- genine sahip V79 hücreleri , toksik purin baz analoğu TG'yi Kurtarma yolu aracılığıyla DNA'larına dahil ederek hücresel metabolizmanın ve sitotoksisitenin inhibisyonuna neden olur (Şekil 1)

Mutasyonlardan dolayı HPRT enzim fonksiyonunun kaybı , Kurtarma yolu hariç tutulduğu için de-novo sentezinin artmasına yol açar . Etkilenen V79 hücreleri bu nedenle toksik TG'yi DNA'ya dahil edemez. Dolayısıyla, mutant hücreler TG varlığında çoğalabilirken, HPRT içeren normal hücreler değildir.

Mutajenisitenin Değerlendirilmesi

İncelenen deney koşullarının herhangi birinde bir test kimyasalının açıkça pozitif olduğu kabul edilir.

• Test konsantrasyonlarından en az biri, eşzamanlı negatif kontrol ile karşılaştırıldığında istatistiksel olarak anlamlı bir artış sergiler,
• uygun bir eğilim testi ile değerlendirildiğinde artış konsantrasyonla ilgilidir ve
• sonuçlardan herhangi biri geçmiş negatif kontrol verilerinin dağılımının dışında.
• Şans eseri, karşılık gelen negatif ve çözücü kontrollerinde düşük bir kendiliğinden mutant frekansı varsa, aralıkları dahilinde mutasyonların konsantrasyonla ilişkili bir artışı tartışılmalıdır.

Önem

HPRT testi, tedaviden sonra gözlemlenen test öğesinin çökelmesi durumunda test pilinin bir parçası olarak Fare Lenfoma Testinin yerini alabilir.