MTT Testi

MTT Testi

MTT testi, mor bir formazan oluşturmak için sarı tetrazolyum tuzu MTT'nin bölünmesine dayanır. Canlı hücrelerin sayısındaki bir azalma, test kültüründe metabolik aktivitede bir azalmaya neden olur. Bu azalma, soğurma ile izlendiği gibi, oluşan mor formazan miktarı ile doğrudan ilişkilidir.

MTT Testi

MTT testi ile hücre proliferasyonu ve test maddesi ile tedavi sonrası hücrelerin canlılığı kolorimetrik olarak belirlenir.

Ekstraksiyon yöntemi ve MTT Boyası ile Hücre Canlılığının Değerlendirilmesi

  • Test öğesi, 37 +/- 1 ° C'de% 10 FBS ile desteklenen DMEM'de belirli bir süre çalkalama altında ekstrakte edilir ve L929 hücreleri ekstrakt ile inkübe edilir.
  • İnkübasyon süresinin bitiminden kısa bir süre önce hücreler mikroskobik olarak değerlendirilir ve MTT reaktifi eklenir. Hücreler yaklaşık 2 saat inkübe edilir. Daha sonra, her bir oyuğa çözündürme çözeltisi (HCl) ilave edilir ve 570 nm'de (referans dalga boyu 650 nm) absorbans belirlenir.
  • Muamele edilmemiş kontrol kültürlerine (çözücü kontrolü) kıyasla% 70'den daha az test özütü ile muamele edilen kültürlerin yaşayabilirliği, ISO 10993-5'e göre açık bir sitotoksik etki olarak kabul edilir.

Protokol

Hücre çizgisi

L929 hücreleri (ATCC No. CCL1, NCTC klon 929 (bağ dokusu fare), L suşunun klonu (DSMZ))

Analiz

MTT testi, mor bir formazan oluşturmak için sarı tetrazolyum tuzu MTT'nin bölünmesine dayanır.

Konsantrasyonlar

4 test özütü konsantrasyonu:% 29.6,% 44.4,% 66.7 ve% 100

Ekstraksiyon süresi

37 ± 1 ° C'de 4-72 saat

- 4 saat (kısa süreli temas ve sağlam cilt veya mukoza)
24 ± 2 saat (kısa süreli ve hastayla sınırlı temas)
72 ± 2 saat (uzun süreli ve kalıcı temas)

Kuluçka süresi

37 ± 1 ° C'de 24-72 saat

Kalite kontrolleri

Solvent Kontrolü: DMEM% 10 FBS

Negatif kontrol: DMEM% 10 FBS'de ekstrakte edilmiş polipropilen

Pozitif kontrol: DMEM% 10 FBS'de ekstrakte edilen lateks

Veri teslimi

Hücre canlılığı, 570 nm'de absorbans ile belirlenir (referans dalga boyu 650 nm)

Olumlu tahmin

Muamele edilmemiş kontrol kültürlerine (çözücü kontrolü) kıyasla% 70'den daha az test ekstresi ile muamele edilen kültürlerin canlılığı, açık bir sitotoksik etki olarak kabul edilir.

Copyright © 2020 | EUROLAB Laboratory Services | Her Hakkı Saklıdır.