MTT Testi

MTT testi, mor bir formazan oluşturmak için sarı tetrazolyum tuzu MTT'nin bölünmesine dayanır. Canlı hücrelerin sayısındaki bir azalma, test kültüründe metabolik aktivitede bir azalmaya neden olur. Bu azalma, soğurma ile izlendiği gibi, oluşan mor formazan miktarı ile doğrudan ilişkilidir.

MTT testi ile hücre proliferasyonu ve test maddesi ile tedavi sonrası hücrelerin canlılığı kolorimetrik olarak belirlenir.

Ekstraksiyon yöntemi ve MTT Boyası ile Hücre Canlılığının Değerlendirilmesi

• Test öğesi, 37 +/- 1 ° C'de% 10 FBS ile desteklenen DMEM'de belirli bir süre çalkalama altında ekstrakte edilir ve L929 hücreleri ekstrakt ile inkübe edilir.
• İnkübasyon süresinin bitiminden kısa bir süre önce hücreler mikroskobik olarak değerlendirilir ve MTT reaktifi eklenir. Hücreler yaklaşık 2 saat inkübe edilir. Daha sonra, her bir oyuğa çözündürme çözeltisi (HCl) ilave edilir ve 570 nm'de (referans dalga boyu 650 nm) absorbans belirlenir.
• Muamele edilmemiş kontrol kültürlerine (çözücü kontrolü) kıyasla% 70'den daha az test özütü ile muamele edilen kültürlerin yaşayabilirliği, ISO 10993-5'e göre açık bir sitotoksik etki olarak kabul edilir.