XTT Testi

XTT testi, aktif mitokondride dehidrojenaz aktivitesi ile turuncu suda çözünür bir formazan ürünü oluşturmak için sarı tetrazolyum tuzu XTT'nin bölünmesine dayanır.

Canlı hücrelerin sayısındaki bir azalma, numunedeki mitokondriyal dehidrojenazların genel aktivitesinde bir azalmaya neden olur. Bu azalma, soğurma ile izlendiği gibi, oluşan turuncu formazan miktarı ile doğrudan ilişkilidir.

XTT testi ile test maddesi ile tedavi sonrası hücrelerin hücre proliferasyonu ve canlılığı kolorimetrik olarak belirlenir.

Ekstraksiyon yöntemi ve XTT Boyası ile mitokondriyal dehidrojenaz aktivitesinin değerlendirilmesi

• Test öğesi, 37 ± 1 ° C'de% 10 FBS ile desteklenen DMEM'de belirli bir süre çalkalama altında ekstrakte edilir ve L929 hücreleri ekstrakt ile inkübe edilir.
• İnkübasyon süresinin bitiminden kısa bir süre önce hücreler mikroskobik olarak değerlendirilir ve XTT reaktifi ve bir elektron birleştirme reaktifi eklenir. Hücreler 1 - 2 saat daha inkübe edilir ve absorbans 450 nm'de belirlenir (referans dalga boyu 650 nm).
• İşlenmemiş kontrol kültürlerine (çözücü kontrolü) kıyasla% 70'in altındaki dehidrojenaz aktivitesi, ISO 10993-5'e göre açık bir sitotoksik etki olarak kabul edilir.