BCA reaktifleri, suda çözünür ve stabil bir BCA (bisinkoninik asit) ve bir alkalin Cu2 + solüsyonundan oluşur.
Her hücrenin bir bileşeni olan sistein, sistin, triptofan ve tirozin amino asitleri bu reaktiflere bağlanır ve bu süreçte Cu2 + ' yi Cu +' ya düşürür . Cu + daha sonra bisinkoninik aside bağlanarak suda çözünür mor bir boya oluşturur.
Mor boyanın yoğunluğu, absorbans tarafından izlendiği gibi kültürdeki hücre sayısı ile ilişkilidir.
Protokol |
|
Hücre çizgisi |
L929 hücreleri (ATCC No. CCL1, NCTC klon 929 (bağ dokusu fare), L suşunun klonu (DSMZ)) |
Analiz |
BCA testi iki reaksiyondan oluşur: |
Konsantrasyonlar |
4 test özütü konsantrasyonu:% 29.6,% 44.4,% 66.7 ve% 100 |
Ekstraksiyon süresi |
37 ± 1 ° C'de 4-72 saat - 4 saat (kısa süreli temas ve sağlam cilt veya mukoza) |
Kuluçka süresi |
37 ± 1 ° C'de 24-72 saat |
Kalite kontrolleri |
Solvent Kontrolü: DMEM% 10 FBS Negatif kontrol: DMEM% 10 FBS'de ekstrakte edilmiş polipropilen Pozitif kontrol: DMEM% 10 FBS'de ekstrakte edilen lateks |
Veri teslimi |
L929 hücrelerinin Büyüme İnhibisyonu, 550 nm absorbansta protein içeriği ölçülerek belirlenir |
Olumlu tahmin |
Muamele edilmemiş kontrol kültürlerine (çözücü kontrolü) kıyasla% 30'dan fazla test ekstresi ile muamele edilen kültürlerin büyüme inhibisyonu, berrak bir sitotoksik etki olarak kabul edilir. |