BCA Boyamalı Sitotoksisite Testi

BCA reaktifleri, suda çözünür ve stabil bir BCA (bisinkoninik asit) ve bir alkalin Cu2 ⁺ solüsyonundan oluşur.

Her hücrenin bir bileşeni olan sistein, sistin, triptofan ve tirozin amino asitleri bu reaktiflere bağlanır ve bu süreçte Cu2 ^{+ '} yi Cu ^{+' ya} düşürür . Cu ⁺ daha sonra bisinkoninik aside bağlanarak suda çözünür mor bir boya oluşturur.

Mor boyanın yoğunluğu, absorbans tarafından izlendiği gibi kültürdeki hücre sayısı ile ilişkilidir.

Ekstraksiyon yöntemi ve BCA Boyama ile hücrelerin büyüme inhibisyonunun değerlendirilmesi

• Test öğesi, 37 ± 1 ° C'de% 10 FBS ile desteklenen DMEM'de belirli bir süre çalkalama altında ekstrakte edilir ve L929 hücreleri ekstrakt ile inkübe edilir.
• Kuluçka süresinin bitiminden kısa bir süre önce hücreler mikroskobik olarak değerlendirilir.
• İnkübasyondan sonra hücreler bir tamponla yıkanır ve ardından BCA reaktifleri eklenir. Hücreler bu reaktiflerle 0.5 - 2 saat inkübe edilir ve absorbans 550 nm'de belirlenir.
• ISO 10993-5'e göre sitotoksik etkiler, hücre büyümesi için bir ölçü olarak kullanılan kültürlerin protein içeriğine göre değerlendirilebilir. Muamele edilmemiş kontrol kültürleri (çözücü kontrolü) ile karşılaştırıldığında% 30'dan fazla test ekstresi ile muamele edilen kültürlerin büyüme inhibisyonu, açık bir sitotoksik etki olarak kabul edilir.