Elüsyon Testi

Elüsyon Testi

Bu in vitro yöntem, test öğesinin sitotoksik potansiyelini USP 41, Bölüm <87> uyarınca mikroskobik olarak analiz eder.

Elüsyon Testi

Önceden tohumlanmış hücreler, test materyalinin bir özütü ile kültürlenir ve ardından 48 saatlik bir işlem süresinden sonra hücrelerin biyolojik reaktivitesi incelenir.

Ekstraksiyon yöntemi ve mikroskobik değerlendirme ile hücrelerin büyüme inhibisyonunun değerlendirilmesi

  • Test öğesi, 37 ± 1 ° C'de% 10 FBS ile desteklenen MEM içinde 24 saat boyunca çalkalama altında ekstrakte edilir.
  • İnkübasyon süresinin sonunda hücreler morfolojik değişiklikler açısından mikroskobik olarak incelenir. Biyolojik reaktivite (hücresel dejenerasyon ve malformasyon), 0 ila 4 arasında bir ölçekte açıklanır ve derecelendirilir (tabloya bakın). Test öğesinin özütü ve kontrollerle işlenen hücre kültürlerinin tepkileri değerlendirilir.
  • Test öğesi özütüne verilen yanıt derece 2'den büyük değilse (hafif reaktif), test öğesi testin gereksinimlerini karşılar.

Derece

Reaktivite

Tüm kültürlerin koşulları

0

Yok

Ayrık intrasitoplazmik granüller; hücre parçalanması yok

1

Hafif

Hücrelerin% 20'den fazlası yuvarlak değildir, gevşek bir şekilde tutturulmuştur ve intrasitoplazmik granüller içermez; ara sıra parçalanmış hücreler mevcuttur

2

Hafif

Hücrelerin% 50'den fazlası yuvarlak değildir ve intrasitoplazmik granüllerden yoksundur; geniş hücre parçalanması ve hücreler arasında boş alanlar yok

3

Orta

Hücre katmanlarının% 70'inden fazlası yuvarlak hücreler içermez veya parçalanmaz

4.

Şiddetli

Hücre katmanlarının neredeyse tamamen yok edilmesi

Protokol

Hücre çizgisi

L929 hücreleri (ATCC No. CCL1, NCTC klon 929 (bağ dokusu fare), L suşunun klonu (DSMZ))

Analiz

Mikroskobik değerlendirme

Ekstraksiyon süresi

24 saat

Kuluçka süresi

48 saat

Kalite kontrolleri

Solvent Kontrolü: MEM% 10 FBS

Negatif kontrol: yüksek yoğunluklu polietilen malzeme (HDPE)

Pozitif kontrol:% 0.1 çinko-dietilditiokarbamat (ZDEC),% 0.25 çinko-dibutilditiokarbamat (ZDBC)

Veri teslimi

USP 41, Bölüm <87> uyarınca test malzemesinin Biyolojik Reaktivitesi

Olumlu tahmin

Test öğesi özütüne verilen yanıt 2. dereceden büyük değilse (hafif reaktif), test öğesi testin gerekliliklerini karşılar

Copyright © 2020 | EUROLAB Laboratory Services | Her Hakkı Saklıdır.