Koloni Oluşturma Testi

Koloni Oluşturma Testi

Bu testte, test öğesinden salınan sızabilir maddelerin sitotoksisitesi, kontrollere kıyasla test öğesi ekstresinin çeşitli konsantrasyonları ile muameleden sonra koloni oluşturma yeteneği ile değerlendirilir.

Koloni Oluşturma Testi

% 50 koloni oluşumunu azaltır seyreltme (IC 50 ) özler (%) dilüsyonları karşı oranları (%) oluşturan görece koloni çizilerek belirlenebilir.

Taze kültür ortamı ile işlenen kültürlerde oluşan ortalama koloni sayısı, hücrelerin mutlak koloni oluşturma kabiliyetini temsil eder ve bu, kültür plakalarında geçiş ve tohumlamadan sonra hücrelerin hayatta kalma oranını yansıtır (% 100 kontrol).

Koloni Oluşturma Yeteneği ile Sitotoksisitenin Değerlendirilmesi

  • Test öğesi, hücre kültürü ortamı ile 37 ± 1 ° C'de tanımlanmış bir süre boyunca ekstrakte edilir ve V79 hücreleri, ekstrakt ile birkaç gün inkübe edilir.
  • İnkübasyon süresinden sonra kültürler mikroskobik olarak gözlemlenir ve PBS tamponu ile dikkatlice yıkanır. Metanol ile sabitlendikten sonra koloniler Giemsa'nın boyama solüsyonu ile boyanır.
  • Boyanan koloniler oda sıcaklığında kurutulur. 50'den fazla hücreden oluşan koloniler manuel olarak sayılır.

Test Öğesi Kabul Kriterleri:

  • MHLW'ye göre IC 50 kabul limiti: ≥% 90
  • Test çözeltisinin% 100 konsantrasyonunda bağıl kaplama etkinliğinin% 30'dan fazla azaltılması sitotoksik bir etki olarak kabul edilir.

Protokol

Hücre çizgisi

V79 hücreleri (ATCC, CCL-93).

Analiz

Kültürlerde oluşan ortalama koloni sayısı, hücrelerin mutlak koloni oluşturma yeteneğini temsil eder ve bu, test öğesi ile tedavi edildikten sonra hayatta kalma oranını yansıtır.

Konsantrasyonlar

6 konsantrasyon test özütü

Ekstraksiyon süresi

37 ± 1 ° C'de 24 saat

Kuluçka süresi

37 ± 1 ° C'de 6-7 gün

Kalite kontrolleri

% 100 kontrol: Taze MEM% 10 FBS

Çözücü kontrolü: MEM% 10 FBS

Negatif kontrol: MEM% 10 FBS'de ekstrakte edilmiş yüksek yoğunluklu polietilen

Pozitif kontroller: MEM% 10 FBS'de ekstrakte edilmiş ZDEC- ve ZDBC- poliüretan film

Veri teslimi

Koloni Oluşturma Yeteneği

Olumlu tahmin

  • MHLW'ye göre IC 50 kabul limiti: <% 90
  • Test çözeltisinin% 100 konsantrasyonunda bağıl kaplama etkinliğinin% 30'dan fazla azaltılması sitotoksik bir etki olarak kabul edilir.
Copyright © 2020 | EUROLAB Laboratory Services | Her Hakkı Saklıdır.