ASTM E1053 - Virüsler için Yüzey Süresi Öldürme Testi

ASTM E1053 - Virüsler için Yüzey Süresi Öldürme Testi

US EPA ve FDA kriterlerine göre ASTM E1053 Virüs Süspansiyonu Zaman-Öldürme Testi, EUROLAB Laboratuvarında basit bir ekran olarak veYA daha kapsamlı GLP çalışma koşulları altında gerçekleştirilebilir.

ASTM E1053 - Virüsler için Yüzey Süresi Öldürme Testi

ASTM E1053 YÖNTEMİNİN ÖZETİ

  • Kullanılacak stok virüs çözülür ve uygun bir konsantrasyona seyreltilir.
  • Çalışma Sponsoru tarafından talep edilmesi halinde, test virüsü uygun seviyeye kadar organik toprak ile yüklenir. Bu, tipik olarak, test ürününün tek aşamalı bir dezenfektan olarak pazarlanması amaçlandığında yapılır.
    • EPA, tek aşamalı dezenfektan iddiası için% 5'lik bir organik kir yükü gerektirir.
  • Test ürünü, uygunsa, Çalışma Sponsoru tarafından belirtilen kullanım-seyreltme ile hazırlanır. Bir virüs geri kazanım kontrolü olarak hizmet etmek için eşit hacimde tamponlu salin veya hücre kültürü ortamı hazırlanır.
  • Hazırlanan viral aşı, bir cam Petri kabı taşıyıcısının tüm yüzeyine yayılır ve kurumaya bırakılır.
  • Kuruma süresinin sonunda test ürünü viral filme uygulanır.
    • Tipik olarak 2.0 ml kullanım-seyreltme test ürünü eklenecektir. Bir sprey ürün kullanılırsa, 6 ila 8 inç mesafeden 4 sprey olarak veya uygun şekilde Sponsor talimatlarına göre uygulanacaktır.
  • Çalışma temas süresinin kapatılmasının ardından, test ve geri kazanım süspansiyonları, bir hücre kazıyıcı kullanılarak hasat edilir ve test maddesinde bulunan aktif bileşen (ler) için en uygun yöntemle nötralize edilir.
    • Yaygın nötralizasyon yöntemleri arasında kimyasal nötrleştiricilerde seyreltme, fiziksel bir jel matris (örneğin Sephacryl jel kolonları) veya bunların bir kombinasyonu ile filtrasyon yer alır.
  • Test maddesinin kullanım-seyreltilmesinin bir alikotu, test süspansiyonuyla aynı şekilde nötralize edilir. Bu, varsa test maddesinin konakçı hücrelere zarar verdiği en düşük seyreltmeyi belirlemek için sitotoksisite kontrolünü oluşturmak için kullanılır.
  • Sitotoksisite kontrolünden bir miktar alınır ve düşük konsantrasyonlu bir viral süspansiyon ile aşılanır. Bu, seçilen nötralizasyon yönteminin etkinliğini doğrulamak için nötralizasyon kontrolünü oluşturmak için kullanılır.
  • Nötralize test, geri kazanım, sitotoksisite kontrolü ve nötralizasyon kontrol süspansiyonları, uygun ortamda seri olarak seyreltilir. Her seyreltme, konak hücre tekli katmanları üzerine dört kez kaplanır. Her bir tek tabakaya ortam eklenir ve konakçı hücre virüs sisteminin uygun süre inkübe olmasına izin verilir. Çoğu tahlil, 7 ila 10 günlük bir süre boyunca inkübe edilir.
  • İnkübasyon süresinin sonunda test, standart hücre kültürü yöntemleri kullanılarak puanlanır.
    • Tepsideki her bir oyuk, hücre yuvarlama, soyulma ve tek katman bozulması gibi enfeksiyonun sitopatik etkilerinin (CPE) varlığı açısından mikroskop altında incelenir. Sitotoksisite kontrol kuyuları test ürününün neden olduğu hasar açısından incelenir. Doğrulayıcı tahliller gerektiği gibi kullanılır.
    • Spearman-Karber yöntemi veya başka bir uygun istatistiksel yöntem, tahlilde bulunan enfeksiyöz virüs miktarını ölçmek için kullanılır.

VİRÜSİDAL ETKİNLİK BAŞARI KRİTERLERİ

  • Taşıyıcı başına en az 4-log 10 bulaşıcı birim, virüs kurtarma kontrolünden kurtarılmalıdır.
  • Test ürünü, testin tüm seyreltmelerinde test virüsünün tamamen inaktivasyonunu gösterir veya
  • nötralize edilmiş test ürünü testte sitotoksisiteye neden olursa, gözlemlenen sitotoksisite seviyesini aşan 3-log 10 azalma
  • Nötralizasyon kontrolleri, tipik olarak bir kontrole göre benzer seviyelerde sitopatik etkilerin gösterilmesi yoluyla, seçilen nötralizasyon yönteminin başarılı olduğunu gösterir.
Copyright © 2020 | EUROLAB Laboratory Services | Her Hakkı Saklıdır.