การทดสอบ HPRT

การทดสอบ HPRT

Bu ในหลอดทดลอง การทดลองนี้ดำเนินการเพื่อประเมินศักยภาพของรายการทดสอบในการกระตุ้นให้เกิดการกลายพันธุ์ของยีนโดยการทดสอบ HPRT (hypoxanthine-guanine-phosphoribosyl-transferase) โดยใช้สายพันธุ์ของเซลล์หนูแฮมสเตอร์ V79 ของจีน ระบบ HPRT จะตรวจจับการกลายพันธุ์ของคู่พื้นฐานการกลายพันธุ์ของเฟรมและการลบและการแทรกขนาดเล็ก

การทดสอบ HPRT

การทดสอบการกลายพันธุ์อื่น ๆ ได้แก่ การทดสอบการกลายพันธุ์แบบย้อนกลับ (โดยใช้แบคทีเรีย) และการทดสอบมะเร็งต่อมน้ำเหลืองของหนู (โดยใช้เซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม)

ในการทำนายผลการกลายพันธุ์ของสารโดยการทดสอบ HPRT ความสามารถในการสร้างอาณานิคมของเซลล์ V79 จะถูกตรวจสอบโดยการเติม 6-thioguanine (TG) ลงในอาหารเลี้ยงเชื้อ สารก่อกลายพันธุ์ทำให้เกิดการกลายพันธุ์เพิ่มเติมในยีนที่เข้ารหัสเอนไซม์ hypoxanthine-guanine-phosphoribosyltransferase (HPRT) การกลายพันธุ์ของยีนนี้ทำให้ลำดับของเอนไซม์แสดงไม่ถูกต้องส่งผลให้สูญเสียฟังก์ชันที่จำเป็นสำหรับการสังเคราะห์นิวคลีโอไทด์ผ่านทาง Salvage pathway

เซลล์สามารถรับนิวคลีโอไทด์ได้โดยผ่านกระบวนการสังเคราะห์แบบ de novo หรือผ่านทางรีไซเคิลแบบประหยัดพลังงาน (Recovery Path) โดยใช้เบสอิสระ (เช่นอะดีนีน, กัวนีน)

ของแข็ง hprt- เซลล์ V79 ที่มียีนรวมเอา TG อะนาล็อกเบสพิวรีนที่เป็นพิษเข้ากับ DNA ของพวกมันผ่านทาง Rescue ซึ่งทำให้เกิดการยับยั้งการเผาผลาญของเซลล์และความเป็นพิษต่อเซลล์ (รูปที่ 1)

การสูญเสียการทำงานของเอนไซม์ HPRT เนื่องจากการกลายพันธุ์เนื่องจากไม่รวมเส้นทางกู้ภัย เดอโนโว นำไปสู่การสังเคราะห์ที่เพิ่มขึ้น เซลล์ V79 ที่ได้รับผลกระทบจึงไม่สามารถรวม TG ที่เป็นพิษเข้ากับ DNA ได้ ดังนั้นในขณะที่เซลล์กลายพันธุ์สามารถแพร่กระจายต่อหน้า TG ได้ แต่เซลล์ปกติที่มี HPRT จะไม่

การประเมินการกลายพันธุ์

สารเคมีทดสอบถือเป็นผลบวกอย่างชัดเจนในเงื่อนไขการทดสอบใด ๆ ที่ตรวจสอบ

  • ความเข้มข้นของการทดสอบอย่างน้อยหนึ่งรายการแสดงให้เห็นถึงการเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติเมื่อเทียบกับการควบคุมเชิงลบที่เกิดขึ้นพร้อมกัน
  • การเพิ่มขึ้นนี้เกี่ยวข้องกับความเข้มข้นเมื่อประเมินโดยการทดสอบแนวโน้มที่เหมาะสมและ
  • ผลลัพธ์ใด ๆ ที่อยู่นอกช่วงของข้อมูลควบคุมเชิงลบในอดีต
  • โชคดีที่หากมีความถี่ต่ำของการกลายพันธุ์ที่เกิดขึ้นเองในการควบคุมเชิงลบและตัวทำละลายที่เกี่ยวข้องควรกล่าวถึงการเพิ่มขึ้นของการกลายพันธุ์ที่เกี่ยวข้องกับความเข้มข้นภายในช่วงของพวกมัน

ความสำคัญ

การทดสอบ HPRT อาจแทนที่ Mouse Lymphoma Test เป็นส่วนหนึ่งของแบตเตอรี่ทดสอบหากรายการทดสอบตกตะกอนหลังจากการรักษา

ลิขสิทธิ์© 2020 | บริการห้องปฏิบัติการ EUROLAB | สงวนลิขสิทธิ์.
WhatsApp