การทดสอบ XTT

การทดสอบ XTT

การทดสอบ XTT ขึ้นอยู่กับความแตกแยกของเกลือเตตระโซเลียมสีเหลือง XTT เพื่อสร้างผลิตภัณฑ์ฟอร์มาซานที่ละลายน้ำได้สีส้มพร้อมกับกิจกรรมดีไฮโดรจีเนสในไมโทคอนเดรียที่ใช้งานอยู่

การทดสอบ XTT

จำนวนเซลล์ที่ทำงานได้ลดลงทำให้กิจกรรมโดยรวมของ mitochondrial dehydrogenases ในตัวอย่างลดลง การลดลงนี้เกี่ยวข้องโดยตรงกับปริมาณฟอร์มาซานสีส้มที่เกิดขึ้นโดยสังเกตได้จากการดูดซึม

ด้วยการทดสอบ XTT การเพิ่มจำนวนของเซลล์และความมีชีวิตของเซลล์หลังการรักษาด้วยสารทดสอบจะถูกกำหนดด้วยสี

การประเมินกิจกรรมไมโตคอนเดรียดีไฮโดรจีเนสโดยวิธีการสกัดและสีย้อม XTT

  • รายการทดสอบถูกสกัดโดยการกวนตามเวลาที่กำหนดใน DMEM ที่เสริมด้วย 37% FBS ที่ 1 ± 10 ° C และเซลล์ L929 จะถูกบ่มด้วยสารสกัด
  • ไม่นานก่อนสิ้นสุดระยะฟักตัวเซลล์จะได้รับการประเมินด้วยกล้องจุลทรรศน์และมีการเติมน้ำยา XTT และรีเอเจนต์การมีเพศสัมพันธ์ของอิเล็กตรอน เซลล์จะถูกบ่มต่อไปอีก 1 - 2 ชั่วโมงและค่าการดูดซับจะถูกกำหนดที่ 450 นาโนเมตร (ความยาวคลื่นอ้างอิง 650 นาโนเมตร)
  • กิจกรรม Dehydrogenase ต่ำกว่า 70% เมื่อเทียบกับวัฒนธรรมควบคุมที่ไม่ได้รับการบำบัด (การควบคุมตัวทำละลาย) ถือเป็นผลต่อเซลล์ที่ชัดเจนตามมาตรฐาน ISO 10993-5

โปรโตคอล

สายเซลล์

เซลล์ L929 (ATCC No. CCL1, NCTC clone 929 (เมาส์เนื้อเยื่อเกี่ยวพัน), โคลนของสายพันธุ์ L (DSMZ))

การวิเคราะห์

การทดสอบ XTT ขึ้นอยู่กับความแตกแยกของเกลือเตตระโซเลียมสีเหลือง XTT เพื่อสร้างผลิตภัณฑ์ฟอร์มาซานที่ละลายน้ำได้สีส้มพร้อมกับกิจกรรมดีไฮโดรจีเนสในไมโทคอนเดรียที่ใช้งานอยู่

ความเข้มข้น

ความเข้มข้นของสารสกัด 4 ชนิด: 29.6%, 44.4%, 66.7% และ 100%

เวลาในการสกัด

37-1 ชั่วโมงที่ 4 ± 72 ° C

- 4 ชั่วโมง (สัมผัสสั้น ๆ และผิวหนังหรือเยื่อบุที่สมบูรณ์)
24 ± 2 ชั่วโมง (การสัมผัสผู้ป่วยในระยะสั้นและ จำกัด )
72 ± 2 ชั่วโมง (ติดต่อเป็นเวลานานและถาวร)

ระยะฟักตัว

37-1 ชั่วโมงที่ 24 ± 72 ° C

การตรวจสอบคุณภาพ

การควบคุมตัวทำละลาย: DMEM 10% FBS

การควบคุมเชิงลบ: โพลีโพรพีลีนสกัดใน DMEM 10% FBS

การควบคุมเชิงบวก: น้ำยางสกัดใน DMEM 10% FBS

การจัดส่งข้อมูล

กิจกรรม Mitochondrial dehydrogenase ถูกกำหนดโดยการดูดซึมที่ 450 นาโนเมตร (ความยาวคลื่นอ้างอิง 650 นาโนเมตร)

การคาดการณ์เชิงบวก

กิจกรรม Dehydrogenase ต่ำกว่า 70% เมื่อเทียบกับวัฒนธรรมควบคุมที่ไม่ได้รับการรักษา (การควบคุมตัวทำละลาย) ถือเป็นผลต่อเซลล์ที่ชัดเจน

ลิขสิทธิ์© 2020 | บริการห้องปฏิบัติการ EUROLAB | สงวนลิขสิทธิ์.
WhatsApp